實(shí)驗(yàn)秘籍 | 瑞孚迪「Alpha技術(shù)」：誰能拒絕又簡單又精確的檢測方法??！

來源: | 作者:/ | 發(fā)布時間: 2025-01-15 | 699 次瀏覽 | 分享到:

實(shí)驗(yàn)通關(guān)秘籍之

Alpha技術(shù)篇

適合所有測量的檢測方法~

Alpha全稱為Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay，是一種基于一對微珠的均相親和檢測方法。Alpha技術(shù)可省去費(fèi)時的ELISA洗滌步驟、擴(kuò)展動態(tài)檢測范圍并提高靈敏度。這種用途廣泛的微珠可包被多種生化物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)獨(dú)特的生物學(xué)檢測。幾乎針對每種研究應(yīng)用都有對應(yīng)的Alpha技術(shù)解決方案，并利用經(jīng)過Alpha技術(shù)驗(yàn)證的EnVision系統(tǒng)進(jìn)行后續(xù)檢測。

PART 01

技術(shù)原理

● Alpha技術(shù)是一種快速、高靈敏、均相、免洗、可在微孔板中進(jìn)行檢測的技術(shù)平臺。Alpha實(shí)驗(yàn)需要供體微珠與受體微珠與靶點(diǎn)進(jìn)行結(jié)合。在680nm光源的激發(fā)下，供體微珠產(chǎn)生的是單態(tài)氧，其在溶液中能夠擴(kuò)散大約200nm的距離。如果受體微珠距離供體微珠足夠接近，便能夠接收到單線態(tài)氧。單線態(tài)氧激發(fā)受體微珠表面的化學(xué)物質(zhì)，引發(fā)一系列化學(xué)發(fā)光級聯(lián)反應(yīng)，從而發(fā)射出特定波長的光信號，反之便不會有信號產(chǎn)生。如圖1，我們會將供體微珠與受體微珠各自與其中一種抗原蛋白相結(jié)合。當(dāng)在檢測體系中存在可以同時結(jié)合這兩種抗原蛋白的雙抗時，便能夠?qū)⑦@兩種抗原蛋白聚集到一起，并在激發(fā)下形成能量共振轉(zhuǎn)移。

● 因此相對于HTRF，Alpha技術(shù)能夠運(yùn)用在一些更為復(fù)雜構(gòu)象的蛋白互作檢測中，并能夠很好地耐受機(jī)制帶來的影響。而將此技術(shù)運(yùn)用在雙抗上時，整個檢測的模型也與HTRF類似。

● 相較于標(biāo)準(zhǔn) ELISA，AlphaLlSA? 技術(shù)擁有更寬的動態(tài)范圍和更高的靈敏度，而且檢測步驟更少、流程更簡單。

圖1

● 除此以外，Alpha還可以提供一種能夠在單個檢測孔中同時檢測雙抗與兩個抗原蛋白各自的結(jié)合特性的檢測方法，便是AlphaPlex檢測技術(shù)。

● 此方法是建立在Alpha技術(shù)的基礎(chǔ)上，通過使用兩種Alpha受體微珠（發(fā)射545nm、645nm信號的AlphaPlex微珠與發(fā)射615nm信號的AlphaLISA微珠），從而達(dá)到在單孔中同時檢測兩個蛋白的目的。在雙抗檢測的運(yùn)用上，具體的模型如圖2。其中兩個抗原蛋白分別用兩種Alpha受體微珠進(jìn)行捕獲，而雙抗自己則在與兩個抗原蛋白互作的基礎(chǔ)上再通過Alpha供體微珠進(jìn)行識別，從而形成可以同時檢測雙抗兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)。而此方法的優(yōu)化也與先前的方法類似，只需確定合適的材料并進(jìn)行抗原蛋白的濃度優(yōu)化，便能快速完成方法的建立。